高效液相测定肾炎解热片中连翘苷的含量

　　目的建立肾炎解热片中连翘苷含量的测定方法。方法采用高效液相色谱法，以shim-pakclc-ODS(4.6mm×150mm，5μm)为色谱柱，以乙腈-0.025mol/L磷酸水(20∶80)为流动相，流速1mL/min，检测波长277nm。结果连翘苷进样量在0.12～0.5μg范围内线性关系良好，平均回收率为97.1%(n=5)，RSD=1.61%。结论本试验含量测定方法可作为该制剂质量控制方法。

　　肾炎解热片由白茅根、连翘等14味中药组成，具有疏解风热、宣肺利水功能，用于急性肺炎的热重寒轻、头面眼睑浮肿等症的治疗。本试验采用高效液相色谱(HPLC)法对该制剂连翘中的连翘苷含量加以测定，经方法学考察，方法专属性、精密度、重复性、回收率试验均符合有关规定，为该制剂质量分析建立了可靠的控制方法。

　　1仪器与试药岛津LC-10A液相色谱仪，浙江大学N3000工作站;DL-360超声波仪，360W，35kHz(浙江象山县石浦海天电子仪器厂)。

　　连翘苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110842-200403);肾炎解热片由辽宁桓仁药业提供。甲醇为色谱纯(天津科密欧公司)。

　　2方法与结果2.1色谱条件以shim-pakclc-ODS(4.6mm×150mm，5μm)为色谱柱;以乙腈-0.025mol/L磷酸水(20∶80)为流动相，流速1mL/min;检测波长277nm。

　　2.2对照品溶液的制备精密称取连翘苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含40μg的溶液，作为对照品溶液。

　　2.3供试品溶液的制备取本品20片研细，取粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL，密塞，称定重量，超声处理25min，放冷，密塞，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密吸取续滤液25mL，蒸至近干，用中性氧化铝2g拌匀，加于中性氧化铝柱(100～120 目，5g，内径1～1.5cm)上，用70%乙醇100mL洗脱。收集洗脱液，浓缩至近干，残渣用甲醇20mL溶解后转移至25mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得。

　　2.4阴性样品溶液的制备按处方去除连翘，其他药味不变，按“2.3”项下方法制备阴性样品溶液。

　　2.5方法专属性考察精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10μL，注入液相色谱仪中。测定结果提示，供试品具有与对照品相同保留时间色谱峰，阴性样品无干扰，方法专属性良好。见图1。

　　2.6线性范围考察精密吸取连翘苷对照品溶液(0.04082mg/mL)2、4、6、8、10μL，注入液相色谱仪中。测定结果经回归处理，Y=1514338.03X+3350.79，r=0.9994。结果提示：连翘苷进样后在0.08～0.4μg范围内线性关系良好。

　　2.7稳定性试验精密吸取供试品溶液10μL，按前述色谱条件进样分析，测定时间为0、2、4、6、8h，结果供试品溶液在8h内稳定。色谱峰面积无明显变化，在此时间内，待测组分化学性质稳定。

　　2.8精密度试验精密吸取对照品溶液(0.04082mg/mL)10μL，按前述色谱条件进样5次，结果提示，色谱峰面积RSD=1.6%，符合有关规定，表明仪器精密度良好。

　　2.9重复性试验取同一批次样品5份，每份0.5g，精密称定，按供试品溶液制备方法操作。分别吸取10μL进样分析。测定结果显示，本品每片含连翘苷0.482mg(n=5)。

　　2.10加样回收率试验取已知含量样品(0.482mg/片，片重0.3g)5份，每份0.25g，精密称定，精密加连翘苷对照品溶液(0.04082mg/mL)10mL，其他按供试品溶液制备方法操作。测定结果见表1。表1加样回收率试验结果(略)

　　2.11样品测定按已确定方法测定3批样品，结果见表2。表2样品中连翘苷含量测定结果(略)

　　3讨论在供试品溶液制备方法考察中，参考文献[1-2]，曾先后采用超声处理法、回流法，鉴于本制剂为中药复方制剂，干扰组分多，经试验，采用甲醇超声处理，经中性氧化铝净化，去除了部分干扰组分，在确立条件下，供试品中测试组分与相邻组分分离度良好。本试验先后采用甲醇-水(30∶70)、乙腈 -0.025mol/L磷酸水(20∶80)为流动相，在后者条件下，连翘苷色谱峰对称，与相邻组分分离度良好。