卡迈舒生物今日推荐阅读-MS培养基母液的配置与保存
仪器与用具
1、仪器:各类天平、磁力搅拌器、冰箱;
2、用具:烧杯、容量瓶、量筒、试剂瓶、标签;
3、试剂:95%酒精,0.1-1NNaOH,0.1-1NHCl,配制MS培养基所需的各种无机物、有机物,蒸馏水。
方法步骤
(一)母液的配制
母液是欲配制培养基的浓缩液,一般配成比所需浓度高10—100倍的溶液。
优点:(1)保证各物质成分的准确性。
(2)便于配置时快速移取。
(3)便于低温保藏。
1、MS大量元素母液(10X)
称10升量溶解在1升蒸馏水中。配1升培养基取母液100ml。
化学药品
1升量
10升量
①
NH4NO3
1650 mg/L
16.5g
②
KNO3
1900 mg/L
19.0g
③
CaCl2·2H2O
440 mg/L
4.4g
④
MgSO4·7H2O
370 mg/L
3.7g
⑤
KH2PO4
170 mg/L
1.7g
2、MS微量元素母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
①
MnSO4·4H2O
( MnSO4·H2O)
22.3 mg/L
(21.4 mg/L)
223mg
②
ZnSO4·7H2O
8.6 mg/L
86mg
③
CoCl2·6H2O
0.025mg/L
0.25mg
④
CuSO4·5H2O
0.025 mg/L
0.25mg
⑤
Na2MoO4·2H2O
0.25 mg/L
2.5mg
⑥
KI
0.83 mg/L
8.3 mg
⑦
H3BO3
6.2 mg/L
62 mg
注意:CoCl2·6H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量(0.25 mgX10=2.5mg)或100倍量(25mg)称取后,定容于100ml水中,每次取10ml或1ml(即含0.25mg的量)加入到母液中。
3、MS铁盐母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
Na2·EDTA
37.3 mg/L
373 mg
FeSO4·7H2O
27.8 mg/L
278 mg
注意配制时,应将两种成分分别溶解在少量蒸馏水中,其中EDTA盐较难完全溶解,可适当加热。混合时,先取一种置容量瓶(烧杯)中,然后将另一种成分逐加逐剧烈震荡,至产生深黄色溶液,最后定容,保存在棕色试剂瓶中。
4、MS有机物母液(100X)
称10升量溶解在100ml蒸馏水中。配1升培养基取母液10ml。
化学药品
1升量
10升量
①
烟酸
0.5 mg/L
5mg
②
盐酸吡哆素(VB6)
0.5 mg/L
5mg
③
盐酸硫胺素(VB1)
④
肌醇
100 mg/L
1 g
⑤
甘氨酸
2 mg/L
20mg
5、生长调节剂
单独配制,浓度为1-5 mg/ml(书中为0.5-1mg/ml),一般配成4 mg/ml 。
配制培养基母液时注意事项:
①一些离子易发生沉淀,可先用少量蒸馏水溶解,在按配方顺序依次混合;
②配制母液时必须用蒸馏水或重蒸馏水;
③药品应用化学纯或分析纯;
④溶解生长素时,可用少量0.5 –1N的NaOH 或95%酒精溶解,溶解分裂素类用0.5–1N的HCl加热溶解。
(二)母液的保存
1、装瓶:将配制好的母液分别装入试剂瓶中,贴好标签,注明各培养基母液的名称、浓缩倍数、日期。注意将易分解、氧化的溶液,放入棕色瓶中保存。
2、贮藏:4℃冰箱。
MS培养基配方
成分
分子量
使用浓度(mg/L)
大量元素
硝酸钾 KNO3
101.11
1900
硝酸铵 NH4NO3
80.04
1650
磷酸二氢钾 KH2PO4
136.09
170
硫酸镁 MgSO4.7H2O
246.47
370
氯化钙 CaCl2.2H2O
147.02
440
微量元素
碘化钾 KI
166.01
0.83
硼酸 H3BO3
61.83
6.2
硫酸锰 MnSO4.4H2O
223.01
22.3
硫酸锌 ZnSO4.7 H2O
287.54
8.6
钼酸钠 Na2MoO4.2 H2O
241.95
0.25
硫酸铜 CuSO4.5 H2O
249.68
0.025
氯化钴 CoCl2.62
237.93
0.025
铁盐
乙二胺四乙酸二钠 Na2.EDTA
372.25
37.3
硫酸亚铁 FeSO24.7H2O
278.03
27.8
有机成分
肌醇
100
甘氨酸
2
盐酸硫胺素 VB1
0.1
盐酸吡哆醇 VB6
0.5
烟酸 VB5或VPP
0.5
蔗糖 sucrose
342.31
30g/L
琼脂 agar
7 g/L
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