2014最新ELISA试剂盒实验基础知识

　　在做ELISA试剂盒实验过程中，难免会遇到各种不同的问题，比如标准曲线不好，试剂盒的回收率，假阴性，假阳性，实验的重复性不好等等。现在就来一一解答用户们在实验过程中遇到的各种疑问!

　　ELISA试剂盒曲线问题：

　　1.OD值不正常

　　试剂盒未回温，试剂盒回温到25℃

　　温度控制不好，控制正确温度

　　孵育时间不准确，控制孵育时间

　　洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增 加，洗涤4-5次，每孔250ul，然后拍干

　　阳光直射，对着风直接吹，避风避

　　酶标仪的波长错误，酶标仪的波长450nm

　　抗体的稀释错误，正确的稀释抗体

　　水质问题，用娃哈哈矿泉水代替

　　2.白 板

　　洗涤液配制错误，正确的配制洗涤液

　　少加液体(错加液体)，正确的步骤加液体

　　3.无 梯 度

　　标准品也污染，换标准品点板

　　OD值不正常，控制温度时间在做一次

　　人为点板，不要点板

　　4.线 性 不 好

　　OD值不正常，控制温度时间在做一次

　　ELISA试剂盒回收率

　　ELISA试剂盒1.空白管阳性高

　　样本本身就是阳性样本，换阴性样本做回收率

　　空白管在实验中被污染，实验中防止交叉污染

　　水质原因用，娃哈哈矿泉水代替

　　2.偏 高

　　添加量不准确，精准的添加量

　　添加浓度不适合，添加合适的浓度

　　取液吹干量多，准确的取液吹干

　　取到其它相层液体，取需用相吹干

　　复溶液未稀释或加入量少，正确的稀释复溶液

　　ELISA试剂盒3.偏 低

　　添加量不准确，精准的添加量

　　添加浓度不适合，添加合适的浓度

　　取液吹干量少，准确的取液吹干

　　复溶液稀释错误或加入量多，正确的稀释复溶液

　　假阴、阳性

　　1，水质原因：点复溶液验证，用娃哈哈矿泉水代替

　　2，实验操作原因

　　吸取到其它相吹干，准确的取液吹干

　　离心不彻底，延长离心时间

　　样本的污染，更换样本

　　乳化未处理完全，温浴(70℃)处理乳化现象

　　3，仪器试剂原因

　　离心管未清洗干净，正确的洗涤器具

　　有机溶剂的影响，ELISA试剂盒做试剂空白看影响结果

　　4，衍生化试剂原因(长时间衍生化试剂变质),更换衍生化试剂

　　5，与曲线好坏相关,，保证曲线的正常