原代细胞培养操作

　　取材：

　　1. 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。

　　2. 把整个孕鼠浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。

　　3. 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。

　　4. 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。

　　5. 剔除胚胎周围的包膜(若胚胎较大，应剪去头、爪)，将胚胎放于无菌的含有平衡盐溶液的培养皿中。用平衡盐溶液漂洗胚胎至清洗液清亮。

　　切割(2人一组)：

　　6. 将部分胚胎转移至一个无菌小瓶中，用平衡盐溶液漂洗。

　　7. 然后用眼科手术剪刀小心地反复剪切胚胎，直到成1mm3左右的小块，再用平衡盐溶液清洗组织块至清洗液清亮。

　　8. 静置数分钟，使组织块自然沉淀到管底，弃去上清。

　　消化、接种培养(2人一组)：

　　9. 视组织块量加入5—6倍的0.25%胰酶液(约3ml)，37℃中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次。

　　10. 静置，吸去上清，加2ml细胞生长液，用吸管反复吹打组织块，使细胞分365教育装备采购网离，静置，使未分散的组织块下沉。

　　11. 取部分细胞悬液接种至加了细胞生长液(约3ml)的培养瓶中(若计数，按每细胞瓶1x106细胞的数量接种)，置于37℃，二氧化碳培养箱中培养。培养3～5天观察结果。