反相高效液相色谱法测定食品中的苏丹红

　　“苏丹红”是一种化学染色剂，并非食品添加剂。它的化学成份中含有一种叫萘的化合物，该物质具有偶氮结构，由于这种化学结构的性质决定了它具有致癌性，对人体的肝肾器官具有明显的毒性作用。

　　建立反相高效液相色谱法测定食品中的苏丹红1号的方法。方法：食品中的苏丹红1号经乙醇提取后用反相高效液相色谱一二极管阵列检测器(DAD)测定。结果：该方法线性范围从0。5～1000 fig/m1，标准差为0。18，相对标准偏差为0。73%，平均回收率为95。43%，最低检出限为0。2 ng，最低检出浓度为0。02 mg/kg。人工合成色素(柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝、靛蓝、靛蓝)不干扰其测定。结论：该方法线性范围广、精密度高、准确度好、选择性强，完全能满足食品中苏丹红1号的定性定量分析。

　　苏丹红1号化学名称为1一偶氮苯基一G一萘酚，是用于溶解剂、油彩、蜡、地板蜡、机油、鞋油、香皂等化工产品中的一种非生物合成着色剂，不溶于水易溶于有机溶剂乙醇、乙腈、氯仿等，分子式：CJ6Hl2 N20，分子量：248。本品具有致癌性，国内外有关规定均严禁在食品中使用苏丹红1号。

　　1 材料与方法

　　1。1 原理苏丹红1号染ls}经乙醇提取后，超滤，滤液经高效液相色谱Cl8柱分离，用二极管阵列(DAD)检测器在478c丌1处进行检测，以保留时间定性，以峰高或峰面积定量。

　　1。2 仪器与试剂

　　1。2。1 乙腈(色谱纯)、水(超纯水，其电阻率>18。2Mf1)、冰醋酸(分析纯)、无水乙醇(分析纯)

　　1。2。2 标准贮备溶液精密称取0。1000 g苏丹红1号标准品(分析纯)，以乙醇溶解并转人100ml容量瓶中，并以乙醇稀释定容至刻度，即为1 g/L的标准贮备液。标准系列的配制：用：丕步稀释法将乙醇稀释为0、0。5。

　　1。0、2。0、4。0、10。0及20。0~g/mL的标准系列。

　　1。2。3 仪器高效液相色谱仪：AgilentlO00型，具DAD检测器，Agilent ZORBAX Cl8柱(150 C`ft×4。6 rnnl，3/an)、万分之一天平、超声波萃取仪

　　1。3 样品前处理样品制备：将采集样品放入一个容量较大的密闭容器中混合均匀。对于固体样品要用打浆机或粉碎机磨细。

　　1。3。1 甜椒或红辣椒粉称取10 g(准确至0。01 g)样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。

　　1。3。2 粉状调味品称取5 g(准确至0。01 g)样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。

　　1。3。3 调味辣椒酱、原味辣椒酱、辣椒油等，称取20 g(准确至0。01g)样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。

　　1。3。4 肉及肉制品称取20 g(准确至0。01 g)样品于三角瓶中，用量筒加入100 ml乙醇。

　　以上样品经超声提取1 h后过滤于三角瓶中，如果滤液浑浊，则取滤液于12000 r/min离心10 min，滤液根据待测物含量的高低进行浓缩或稀释，测定前取一部分过0。45岬膜，滤液待测。

　　1。4 色谱条件流动相：0。1% (体积分数)乙酸 乙腈=20 80：现代预防医学2oo5年第32卷第12期Modem Preventive Medicine，2oo5，vl01。32，No。12

　　色谱柱：Agilent ZORBAX Cl8柱(150 cn1×4。6咖，3/an)，柱温：常温;流速：1。0 ml/min，恒流;二极管阵列检测器，检测波长：478 nln，峰宽40 nln，参考波长360 nln，峰宽100 nm;

　　进样量：10 l。

　　2 结果与讨论

　　2。1 线性范围的测定

　　2。1。1 标准系列1的测定将0、0。50、1。0、2。0、4。0、10。0、20。0 gg/ml的标准系列，每个标准进10 分析。

　　标准浓度(gg/mL) 0 0。50 1。0 2。0 4。0 10。0 20。0峰面积(roAU*S) 0 1。12 2。85 4。85 9。72 24。57 48。69以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。回归方程：y=2。43x 0。076;

　　a=0。076，b=2。43;7=0。99992。1。2 标准系列2的测定 将0。20。0、50。0、100。0、

　　200。0、500。0及1000。0~g/ml的标准应用液，每个进10 1分析。

　　面积为纵坐标，浓度为横坐标绘制标准曲线。

　　回归方程：y=2。53x一10。17;

　　a=10。17，b=2。53;7=0。9999

　　由上述结果可知，在0。5 ～1000~g/ml范围内线性良好。

　　2。2 精密度试验分别取1、10和40 pg/mL标准应用液每个浓度重复测定9次，其标准差分别为：0。040、0。18和0。30;相对标准偏差(变异系数)为：1。41%、0。73%和0。31%。

　　2。3 准确度试验于样品中分别加入2。0，10及40 vg/ml苏丹红1号标准，作加标回收试验。

　　2。4 最低检出限的测定 实验测得其最低检出限0。2 ng，如果样品取10 g，提取后最后定容至10 rnl，进10 分析，则最低检出浓度为0。02mg/kg。

　　2。5 提取溶剂的选择本方法选择了无水乙醇、乙腈作为萃取剂，经检测无水乙醇与乙腈的提取效果相同，本着经济、安全的原则，最终确定选无水乙醇作的样品的提取溶剂。

　　两种溶剂的提取效果试验：分别选取3种不同性状的样品，均加入10~g/rnl的苏丹红1号标准溶液，分别用无水乙醇和乙腈提取，两种溶剂提取效果无差异。

　　2。6 干扰试验将样品中分别加入人工合成色素柠檬黄、日落黄、胭脂红、苋菜红、亮蓝、靛蓝等，均不干扰苏丹红1号测定。